Comparison of semen characteristics and sperm cryopreservation in common marmoset (Callithrix jacchus) and black-tufted-ear marmoset (Callithrix penicillata).

BACKGROUND: The common marmoset (Callithrix jacchus) is one of the most studied Neotropical primates regarding reproduction. However, little has been reported on the black-tufted-ear marmoset (Callithrix penicillata), which may produce fertile hybrids with other Callithrix. This is the first study to evaluate sperm freezing from black-tufted-ear marmoset. METHODS: Testicles from all animals were measured, and semen was collected by penile vibrostimulation. Samples were analyzed after collection, after chilling and addition of glycerol, and after thawing. RESULTS AND CONCLUSIONS: Fresh semen from both species was similar in many aspects. Additionally, there is a relationship between total motility, plasma membrane integrity, and acrosome integrity observed in sperm samples from both species. We managed to evaluate fresh and thawed sperm with suitable methods for use under zoo or field conditions. However, TEST egg yolk with glycerol at 4% and 6% concentration was not effective for sperm protection in both species during cryopreservation.

Estudo endócrino reprodutivo e do comportamento sócio-sexual de sagui-de-tufo-preto (Callithrix penicillata) mantido em cativeiro / Reproductive endocrine and socio-sexual behavior study of black-tufted-marmoset (Callithrix penicillata) kept in captivity

A comunicação do estado reprodutivo nos primatas da família Callithrichidae, depende principalmente dos comportamentos sócio-sexuais como um sistema de sinalização primário, uma vez que nestas espécies a ovulação não é percebida pelos machos. Neste trabalho, os padrões de comportamentos sócio-sexuais foram analisados em conjunto com as concentrações de metabólitos fecais dos esteróides sexuais progesterona (MFP), estradiol (MFE) e testosterona (MFT) em casais cativos de Sagüi-de-tufos-pretos (Callithrix penicillata), nas diferentes fases do ciclo ovariano. O grupo estudado era composto por quarto casais adultos, mantidos no Centro de Reabilitação de Animais Selvagens da prefeitura de São Paulo. Os padrões comportamentais foram registrados pelo método de amostragem focal por intervalo de tempo a cada 30 segundos, cinco vezes por semana, totalizando 14.400 registros por animal. A mensuração das concentrações de metabólitos fecais dos esteroides sexuais foram realizados pelo método de enzima imunoensaio (EIE). Os resultados obtidos dessas concentrações possibilitaram a determinação endócrina das fases do ciclo ovariano (folicular e luteal) e de suas respectivas durações, assim como a determinação da fase periovulatória. Foram caracterizados 31 ciclos ovarianos completos, com duração de 24,3±4,1 dias (média ±DP), sendo que a fase folicular compreendeu 13,04±4,8dias e a fase lútea 11,2±4,2 dias. Os comportamentos sócio-sexuais (marcação por cheiro, cheirar genitália, catação e apresentação sexual) e a variável "proximidade" mostraram-se significativamente mais prevalentes na fase periovulatória do que nas demais fases do ciclo. Não houve alteração das concentrações de MFT dos machos ao longo de todo o período estudado. A análise conjunta das concentrações de metabólitos fecais de esteróides sexuais e dos comportamentos sócio-sexuais possibilitou um melhor entendimento das relações endócrino-comportamentais e reprodutivas de C. penicillata.

The communication of the female reproductive status in Callithrichidae relies mainly on the socio-sexual behavior, as generally the ovulation is concealed in this primate family by a primary signaling system. In this study the socio-sexual behavior patterns was analyzed in association with the concentration of fecal metabolites of sex steroid hormones progesterone (MFP), estradiol (MFE) and testosterone (MFT) in captive couples of Black-Tufted-Marmoset (Callithrix penicillata), during the different phases of the ovarian cycle. The studied group was composed of four adult couples kept in the São Paulo City Wild Animals Rehabilitation Center. The behavioral patterns were record by focal samplings, with 30 seconds intervals for each observation, five days a week, totalizing 14.400 registers per animal. The measurement of fecal metabolites of progesterone (MFP), estradiol (MFE) and testosterone (MFT) proceeded by enzyme immune assay (EIA). The results allowed to determine the duration of the ovarian cycle and to characterize three different phases (follicular, periovulatory and luteal). It was possible to determine 31 complete cycles that lasted 24.3±4.1 days (Mean ± SD). The follicular and luteal phases lasted 13.04±4.8 and the luteal phase 11.2±4.2 days. The behavioral patterns (scent marking, sniff genitals, grooming and sexual presentation) were more prevalent in the periovulatory phase as the behavioral variable "proximity" as well. There were no variations in the concentration of MFT in the males during the period studied. The associated analyses of the fecal metabolite of sex steroids and the socio-sexual behaviors led to a better understanding of the factors involved in the reproduction of C. penicillata.

Semen characteristics of captive common marmoset (Callithrix jacchus): a comparison of a German with a Brazilian colony.

BACKGROUND: The common marmoset (Callithrix jacchus) is of interest for reproductive studies because of their high and variable fertility in captivity. However, to understand this variability, much basic information still needs to be gathered. This study is the first to characterize marmoset semen comparing a German and a Brazilian colony. METHODS: All animals were weighted, and semen samples were collected by penile vibratory stimulation and analyzed according to standard criteria. RESULTS AND CONCLUSIONS: The German animals had a higher mean and maximum weight than the Brazilian. Further, sperm concentration tended to be higher with heavier animals in the German population, but not in the Brazilian. Additionally, major defects tended to be more frequent with higher weight but also only in German sample. In spite of these differences, the total range and variability in sperm concentration were similar in both populations, suggesting that this is characteristic for the species.

Avaliação do espermograma de leões africanos (Panthera leo, Linnaeus, 1758), mantidos na Fundação Parque Zoológico de São Paulo / Spermogram of african lions (Panthera leo, Linnaeus, 1758) housed at Fundação Parque Zoológico de São Paulo

O presente estudo teve por objetivo avaliar o espermograma de um grupo de leões africanos mantidos em cativeiro na Fundação Parque Zoológico de São Paulo, como um aspecto a ser considerado na avaliação do potencial reprodutivo para a aplicação de técnicas dereprodução assistida. Foram submetidos a eletroejaculação 14 exemplares machos, adultos de Leão Africano, utilizando-se o método da eletroejaculação. Logo após a colheita, cada uma das 13 amostras obtidas foi examinada quanto ao volume, pH e aspecto geral, seguida pela avaliação da motilidade, movimento progressivo, índice demotilidade espermática e concentração. Uma alíquota do ejaculado foi fixada em solução de formol-salina a 10% e analisado em câmara úmida ao microscópio de interferência de fase, para o estudo dos aspectos morfológicos, classificando as alterações dos espermatozóides em defeitos maiores e menores. Os resultados foram: volume 5,83 ±3,35 ml; concentração 11,62 ± 14,51 x 106 espermatozóides/ml; motilidade total 73,85 ± 11,02 %; motilidade progressiva 3,35 ±0,63; índice de motilidade espermática 70,42 %, pH 8,1 ± 0,5; defeitos maiores 38,12 ± 19,41 %; defeitos menores 17,43 ± 10,36 %; defeitos totais 55,55 ± 19,30 %. Os defeitos maiores mais freqüentes foram gota citoplasmática proximal, peça intermediária dobrada com gota citoplasmática e peça intermediária dobrada. A cauda dobrada foi o defeito menor mais encontrado.

The aim of this study was to analyse the spermogram of a group of captive African lions (Panthera leo), housed at the Fundação Parque Zoológico de São Paulo, as a subject to avaluate the reproductive potential of the animals, an important aspect to apply artificial reproductive techniques. After chemical restraining, semen from 14 adult male lions was obtained by electroejaculation and the samples were examined right after the collection. The characteristics analyzed were: volume, pH, general aspect, motility, progressive motility, spermatic motility index and concentration. One aliquot of the samples were fixed in saline-formol solution 10% and examined under Phase Contrast Microscopy for morphological evaluation, classifying in minor and major defects. The results were: volume 5,83+/-3,35 ml; concentration11, 62 +/- 14,51 x 106 sperm cells/ml; total motility 73,85 +/- 11,02 % ; progressive motility 3,35 +/- 0,63; spermatic motility index 70,42 %, pH 8,1 +/- 0,5; major defects 38,12+/- 19,41 %; minor defects 17,43 +/- 10,36 %; total defects 55,55 +/- 19,30 %. The more frequent major defects were: proximal droplet, bent midpiece with cytoplasmic droplet and bent midpiece. Bent tailwas the most frequent minor defect observed.

Avaliação das características seminais de macacos pregos (Cebus apella) mantidos em cativeiro, antes e após vasectomia bilateral / Semen characteristics evaluation in capuchin monkey (Cebus apella) in captivity, before and after bilateral vasectomy

Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da vasectomia bilateral nas características seminais de macacos pregos (Cebus apella) mantidos em cativeiro. Foram utilizados seis animais da Fundação Parque Zoológico de São Paulo. Sêmen foi colhido por eletroejaculação, após anestesia geral dos animais. A primeira colheita foi realizada 15 dias antes da vasectomia e as colheitas posteriores foram realizadas com intervalo de 30 dias até o momento da eliminação completa de espermatozóides do líquido seminal. Imediatamente após a ejaculação, o sêmen foi avaliado quanto suas características físicas, iniciando-se pelo volume (ml) da fração líquida e medição do pH. Posteriormente foram avaliados motilidade (%) e vigor espermático (0-5). Uma fração do sêmen foi diluída em formol salina 10%, para posterior avaliação da concentração espermática (cel/ml) e das características morfológicas (%). A integridade do acrossoma foi avaliada apenas na primeira colheita e a concentração espermática foi avaliada em apenas quatro animais na colheita antes da vasectomia devido ao fato de não haver quantidade suficiente de sêmen. Na primeira colheita após a vasectomia, todos os animais apresentaram espermatozóides com motilidade e vigor iguais a zero. No entanto, a concentração espermática pode ser avaliada até a segunda colheita pós-vasectomia, apresentando as Médias/EP 2.8±1.3 x 10 elevado a 6ª /ml antes da vasectomia e 4.7±1.6 e 0.8±0.7 x 10 elevado a 6ª /ml, após a vasectomia, respectivamente. Apenas na terceira colheita a média da concentração espermática foi igual a zero. Os resultados sugerem que machos vasectomizados devam voltar ao grupo, sem risco de fecundação acidental, após três meses da realização da vasectomia.

The effects of bilateral vasectomy on the seminal characteristics were assessed in capuchin monkeys (Cebus apella). Six adult male monkeys were housed separately in outdoor pens at the Fundação Parque Zoológico de São Paulo. Semen samples were collected by electroejaculation, after anesthetized the animals, 15 days before and once a month from 1 to 5 months after vasectomy. Immediately after the ejaculation, semen was analyzed for volume (ml), pH, motility (%), vigour (0-5), concentration (cells / ml), defects (%) and percentage of intact acrosoma (%). The percentage of intact acrossoma was analyzed only in the collection before the vasectomy and the concentration was done in only four males in these collection because have no semen enough for all analyses. One month after the vasectomy ejaculated spermatozoa were non-motilite and non-vigour in all vasectomized males. In addition the Mean/SEM of cells/ml before the vasectomy was 2.8±1.3 x10 involution 6ª /ml and after two months of the vasectomy was 4.7±1.6 x10 involution 6ª/ml, 0.8±0.7 x106/ml,respectively. Only after the thirty month the number of cells/ml was zero. Our results suggest that the vasectomized males may be back to the group, without risks of accidental fecundating, only 3 months after vasectomy.

Estudo da correlação das características citológicas vaginais e os níveis séricos de estradiol e progesterona em leão africano (Panthera leo) mantidos em cativeiro / Vaginal citology, serum estradiol and progesterone: a correlation study on captive African lions (Panthera leo)

Foram estudados 11 exemplares de fêmeas adultas de leões africanos (Panthera leo) mantidas na Fundação Parque Zoológico de São Paulo (FPZSP) quanto às características da citologia vaginal, níveis hormonais (estradiol e progesterona) e suas correlações. As características celulares vaginais encontradas nas leoas foram semelhantes às descritas para os felinos domésticos. Adotando-se os padrões hormonais de estradiol (E2) e progesterona (P4) que definem as fases do ciclo estral de felinos domésticos, foi possível caracterizar três fases do ciclo ovariano nas leoas: Diestro, Estro e Interestro. O nível médio de E2 sérico encontrado na fase caracterizada como Estro (23,33 + / - 2,92 pg/ ml;, apresentou-se mais alto do que nas outras fases estudadas e o nível médio de P4 sérico encontrado na fase de Diestro (20,12 + / - 17,55 ng/ ml; apresentou diferença estatística significativa em comparação às outras fases estudadas. Demonstrou-se também, a existência de correlação de intensidade média entre os níveis séricos de P4 e o número de células superficiais corneificadas (r= - 0,603 e p = 0,0496) e entre P4 e células intermediárias (r = 0,637 e p = 0,0350). Também foi demonstrada a existência de correlação negativa de forte intensidade entre os números de células superficiais corneificadas e o de células intermediárias. (r = -0,979 e p < 0,0001). Concluímos que a correlação entre as características celulares vaginais e os níveis séricos de progesterona e estradiol permitiram-nos determinar três diferentes fases do ciclo ovariano da fêmea de leão africano.

Eleven captive adult female African lions (Panthera feo) at the Fundação Parque Zoológico de São Paulo were blood sampled in order to assess the serum hormone levels (estradiol and progesterone) and their correlation with the vaginal citology. The morphological and stainning characteristics of vaginal cells were similar to those described for domestic cats. Based on hormonal proflles of estradiol and progesterone described for domestic cats, three different phases for the ovarian cycle of the lionesses were clearly described: diestrus, estrus and interestrus. The mean serum estradiol concentrations in the estrus (23,33 + / - 2,92 pg/ ml) were significantly higher than in diestrus and interestrus. The mean serum progesterone values in diestrus (20,12 + / - 17,55 ng/ml) were significantly higher than in estrus and interestrus. There were correlations between progesterone values and the number of superficial cornifled vaginal cells (r = - 0,603 and p = 0,0496) and between progesterone and intermediate cells (r = 0,637 and p = 0,0350). There were also a strong negative correlation between the number of superficial cornified vaginal cells and intermediate cells (r= -0,979 e p < 0,0001). It concluded that the correlations between vaginal cells and the serum estradiol and progesterone levels allowed us to identify three different phases of the ovarian cycle in female African lion.

O efeito das enzimas hialuronidase e tripsina na liquefação do sêmen de macacos pregos (Cebus apella) / The effect of hyaluronidase and trypsin ensymes on liquefaction of semen in capuchin monkey (Cebus apella)

Os efeitos das enzimas hialuronidase e tripsina foram avaliados quanto à liquefação, motilidade, vigor e integridade do acrossoma, no sêmen de seis macacos pregos (Cebus apeiia), mantidos na Fundação Parque Zoológico de São Paulo. O sêmen foi colhido por eletroejaculação, após anestesia geral, e a fração líquida foi imediatamente avaliada. A fração coagulada do sêmen foi tratada com as enzimas hialuronidase e tripsina, na dose de 1mg/ml, diluídas em meio 199 (Nutricel, Campinas/SP, Brasil), na proporção 1:4 e examinada após 5 e 15 minutos. Test t de Student foi utilizado para comparar os tratamentos. Não houve diferença significativa quanto a motilidade, vigor e integridade de acrossoma (p > 0.05), entre a fração de sêmen coagulado diluído em hialuronidase e tripsina, após cinco ou quinze minutos. No entanto, houve diferença significativa quanto a motilidade e vigor entre a fração líquida e a coagulada do sêmen (p < 0.05), após quinze minutos. Não houve diferença significativa com relação à integridade de acrossoma (p > 0.05) entre a fração líquida e coagulada do sêmen, após 15 minutos. De acordo com os resultados, podemos concluir que não houve efeito aparente na fração coagulada do sêmen tratado com as enzimas hialuronidase e tripsina com relação a motilidade, vigor e integridade do acrossoma. No entanto, houve diferença significativa entre a fração líquida e coagulada do sêmen com relação a motilidade e vigor, porém não quanto à integridade do acrossoma. De maneira geral, em ambos os tratamentos, não houve a completa dissolução do coágulo.

The effect of the enzymes hyaluronidase and trypsin were recorded on the motility, vigor and acrosome integrity in the semen of capuchin monkey (Cebus apella). The animals (n=6) were maintained at Fundação Parque Zoológico de São Paulo. Under anesthesia semen samples were collected by electroejaculation. Immediately after the ejaculation, the semen liquid fraction was analyzed for volume (ml), pH, motility (%), vigor (0-5), concentration (cells/ml), defects (%) and percentage of intact acrosome (%). The coagulated fraction was treated with a solution of hyaluronidase or trypsin, 1mg/ml in commercial medium (199-Nutricel, Campinas/SP, Brazil) in a proportion of 1:4 and the samples were examined after 5 and 15 minutes. The Student T Test (95%) was used to compare the treatments. There was no significant difference in the motility, vigor or acrossome integrity (p > 0.05) between coagulated fraction diluted either in trypsin or in hyaluronidase, after 5 or 15 minutes. However, there was significant difference in motility and vigor between liquid and coagulated fraction, after 15 minutes, for both treatments (p<0.05), but there were no difference in acrosome integrity (p > 0.05). In conclusion, there were no apparent effects in the coagulum for both treatments regarding motility, vigor and acrosome integrity. There were significant differences between liquid and coagulated fractions regarding motility and vigor, but not for acrosome integrity. In both enzyme treatments there were no complete dissolution of the coagulum.

Renal ultrasonographic evaluation in the oncilla (Leopardus tigrinus).

Ultrasonography is currently used in veterinary medicine to examine the anatomy and physiology of internal organs and to establish normal standards for exotic animal species. Specifically, the kidneys may be evaluated and measured in length, width, and height. The kidneys in 33 oncilla (Leopardus tigrinus), including 20 males and 13 females, were opportunistically located, characterized, and measured by ultrasound using a 7.5-MHz linear transducer at two different zoologic facilities in São Paulo, Brazil. Renal volume was calculated from these linear measurements. The mean linear measurements and volume of the right and left kidneys were not significantly different.

Epidemiologia da Leptospirose em animais silvestres na Fundação Parque Zoológico de São Paulo / Epidemiology of the Leptospirosis in wild animals at the Fundação Parque Zoológico de São Paulo

A Leptospirose é uma doença bacteriana de caráter zoonótico que afeta os animais domésticos, silvestres e o homem. Levantamentos sorológicos têm demonstrado o envolvimento de diferentes espécies sinantrópicas e silvestres na epidemiologia da doença. Com o objetivo de conhecer melhor a epidemiologia da Leptospirose dentro da Fundação Parque Zoológico de São Paulo, foi realizado um estudo sorológico nos animais silvestres mantidos em cativeiro, no período de 1996 a 1999. Foram colhidas amostras de sangue de 302 animais atendidos na rotina da Divisão de Veterinária, das quais 59 apresentaram resultado positivo (19.5 por cento) para a prova de Soroaglutinação Microscópica. Os sorovares mais prováveis para o conjunto total de resultados foram : copenhageni (15/59=25.4 por cento), pomona (13/59=22 por cento) e castellonis (10/59=16.9 por cento). Entre os animais silvestres examinados os sorovares mais prováveis foram : Família Callithrichidae : castellonis (3/3=100 por cento), Família cebidae : copenhageni : (13/21=65 por cento), grippotyphosa (2/21=9.5 por cento) e castellonis (1/21=44.7 por cento). Família felidae : pomona (12/17=70.5 por cento), icterohaemorrhagiae (2/17=11.7 por cento) e grippotyphosa (1/17=5.8 por cento), Família canidae : castellonis (2/4=50 por cento), cynopteri (1/4=25 por cento) e mini (1/4=25 por cento), Família cervidae : mini (1/1=100 por cento), Família bovidae : copenhageni (2/3=66.6 por cento), pomona (1/3=33.3 por cento), Família dasyproctidae : castellonis (2/3=66.6 por cento), Família macropodidae: sentot (1/1=100 por cento), família giraffidae : castellonis (1/1=100 por cento). Animais de vida livre como ratos (Rattus norvegicus) e gambás (Didelphis marsupialis) também foram submetidos a prova de soroaglutinação necroscópica e cultura bacteriológica. Foram encontrados testes positivos para o sorovar icterohaemorrhagiae em 42,8 por cento dos ratos e 40 por cento dos gambás estudados. As freqüências de positivos quando analisadas do ponto de vista da localização espacial dos recintos destes animais, permitiram a verificação da existência de áreas críticas para exposição à leptospira dentro da Fundação Parque Zoológico de São Paulo...

Analysis of some normal parameters of the spermiogram of captive capuchin monkeys (Cebus apella Linnaeus, 1758 )

Nine adult males of capuchin monkey (Cebus apella) were electro-ejaculated with a rectal bipolar probe under general anaesthesia with tiletamine -zolazepan association. From the obtained ejaculate, we only analysed the liquid fraction in order to avoid any kind of chemical treatment to attain dissolution of the seminal coagulum. The mean obtained volume was 0,2ml with the sperm concentration of 56.169 x 10(6) sperm/ml and mean motility 68,4 percent and vigor 2,6. The mean percentage of morphologic normal spermatozoa was 39 percent. The technique was efficient for semen collection in Cebus apella and allowed seminal evaluation without possible sperm lesions caused by chemical treatment for coagulum dissolution

Valores de referência das provas de funções hepática, renal e de alguns eletrólitos em Cebus apella, anestesiados com cetamina / Serum biochemical profile of healthy Cebus apella, anesthetized with ketamine

Foram analisadas 127 amostras de soro sangüíneo, obtidas de macacos-prego (Cebus apella), anestesiados com cetamina. Quantificaram-se as provas de função hepática (proteínas totais, albumina, glicose, bilirrubinas e atividade enzimática de ALT, AST e ALP), de função renal (uréia e creatinina), bem como alguns eletrólitos (sódio, potássio, cloro, cálcio e fósforo). Os valores médios obtidos foram analisados e comparados entre grupos, de acordo com o sexo e a faixa etária. Dentre as provas de função hepática, os valores de ALP e ALT dos animais jovens mostraram-se superiores aos dos adultos, enquanto os níveis de AST foram maiores nos machos jovens em relação aos machos adultos. Os níveis de albumina foram maiores nos machos adultose fêmeas jovens e a proteína total apresentou valores mais altos nas fêmeas adultas. Relativamente às provas de função renal, os níveis de creatinina mostraram-se maiores nos machos adultos, enquanto os níveis de uréia foram maiores nos machos jovens. Quanto aos eletrólitos, os níveis séricos de cloretos foram superiores nas fêmeas jovens enquanto o sódio mostrou-se mais elevado nos machos adultos do que nas fêmeas jovens.

Blood serum samples obtained from 127 Capuchin monkeys, anesthetized with ketamine, were analysed. Hepatic function tests (total protein, albumin, glucose, bilirrubins and enzimatic activity of ALT, AST and ALP), renal function tests (urea and creatinine), and some electrolytes (sodium, potassium, chloride, calcium and inorganic phosphorus) were quantified. Differences related to sex and age were studied. Among the hepatic function tests, the values of ALP and ALT were higher in the young animals, while the levels of AST were higher in the young males when compared to adult males. The albumin parameters were more elevated in adult males and females than in young males and the total protein showed higher in adult females. In relation to the renal function tests, the levels of creatinine were more elevated in adult males and the urea were more elevated in young males than in adult animals. Chloride were higher in young females while sodium showed more elevated in adult males than young females.